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基因编辑技术与动物模型构建研讨会·4月腾讯会议

基因编辑技术与动物模型构建研讨会
2022年4月9-10日 腾讯会议网络会议室
【网络学习班背景】
CRISPR/Cas9 是细菌和古细菌在长期选择压力中形成的一种适应性免疫防御,可用来有效抵御病毒及外源DNA的入侵。CRISPR的Type II已经被广泛用于基因工程,它包含Cas9,crRNA和tracrRNA,其中crRNA含有能够识别20bp的靶向互补序列。Cas9,crRNA和tracrRNA组成复合体,识别并结合crRNA互补的序列,然后解开DNA双链,Cas9中的HNH活性位点剪切crRNA的互补DNA链,RuvC活性位点剪切非互补链,最终导致DNA的双链断裂(DSB),进而实现基因的敲除和插入。
目前,CRISPR/Cas9系统已经广泛用于对哺乳动物细胞,细菌,斑马鱼,小鼠,猪,猴的基因编辑。本学习班将详细讲解CRISPR/Cas9基因编辑工具原理,操作流程,理论结合实践,将让大家详细了解到具体如何利用CRISPR/Cas9技术构建基因修饰动物等。学习班将为相关科研工作人员和兴趣爱好者提供了很好的培训资源。
 
【预期目标】
1、掌握基因打靶与基因编辑技术(ZNF,TALENs,CRISPR/Cas9),能够设计sgRNA靶点,构建CRISPR/Cas9质粒,用于基因敲除和敲入。
2、掌握CRISPR/Cas9质粒转染方法, 阳性细胞克隆筛选方法体系,基因编辑细胞系的建立,基因修饰情况分析方法。
3、掌握CRISPR/Cas9脱靶产生的原因,脱靶检测方法,降低脱靶问题的方法
4、掌握CRISPR/Cas9的实际应用,构建动物模型,对构建基因修饰小鼠和基因修饰大动物(猪)有较深入了解。
5、掌握新基因编辑工具,如:Cpf1, C2C2, base editing等。
6、掌握基因编辑研究领域前沿进展,基因编辑工具的拓展应用、临床应用等,形成利用基因编辑工具结合自己研究内容等科学思维。
7、Base editor 使用方法。
8、基因编辑工具用于检测新型冠状病毒、基因编辑工具有可能应用于新冠治疗等应用的介绍与拓展
 
【详细日程

基因编辑技术与动物模型构建研讨会日程
日期 时间 主题 详细内容
第一天上午 9:00-10:30 基因修饰技术简介(一) 基因打靶与基因编辑技术(ZNF, TALENs,CRISPR/Cas9)介绍
基因编辑、基因修饰、基因打靶、转基因、基因敲除、基因敲入等专业领域概念梳理
CRISPR/Cas9结构和特点
如何使用CRISPR/Cas9系统对特定基因进行敲除或定点插入(详细方法步骤)
拓展如何提高定点敲入效率等知识
10:30-10:45 休息
10:45-12:00 基因修饰技术简介(二) 基因编辑工具Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14的结构、特点、工作原理
如何使用Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14系统进行编辑
Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14与Cas9的比较
Cas9、Cas12(Cpf1)、Cas13(C2C2)、Cas14的应用和技术展望
上午现场答疑
12:00-13:30 午饭及午休
第一天下午 13:30-14:00 CRISPR(sgRNA)设计方法和相关网站介绍 sgRNA设计方法和相关网站介绍
CRISPR(sgRNA)的在线设计(在线互动设计演练)
14:00-15:30 基因编辑实验详细操作 gRNA oligos模板退火
退火gRNA与线性化CRISPR/Cas9载体连接
连接产物转化到大肠杆菌(DH5α),转化产物涂板培养,CRISPR/Cas9重组子细菌克隆挑取,扩大化培养,鉴定阳性克隆
细胞转染(Electroperation,Nuclefection,Nanofection,X-fection)等介绍与应用拓展
单细胞克隆筛选(有限稀释法,滤纸法、环法、流式分选法等)方法介绍与应用拓展
15:30-15:45
15:45-17:00 利用CRISPR/Cas9技术编辑动物细胞系 CRISPR/Cas9质粒细胞转染方法
阳性细胞克隆筛选,基因修饰基因组DNA模板快速制备
目的靶基因的基因组DNA片段的PCR扩增,电泳检测PCR产物
PCR产物退火变性,T7E1酶切,电泳鉴定基因修饰情况
17:00-17:30 CRISPR/Cas9关键点总结、归纳、拓展 基因编辑关键知识点归纳、总结和提炼
CRISPR/Cas9技术应用拓展(如CAB基因敲入方法等介绍)
第二天上午 9:00-10:30 利用基因编辑技术构建基因敲除或敲入小鼠 基因工程小鼠的详细分类与比较
小鼠受精卵分离和培养
CRISPR/Cas9系统显微注射到小鼠受精卵
受精卵显微注射后回输到代孕母鼠体内
PCR和T7E1分析和鉴定基因敲除小鼠(Founder)
基因敲除小鼠基因敲除情况分析
CRISPR/Cas9构建基因敲除小鼠详细实验流程归纳和总结
10:30-10:45 休息
10:45-11:15 利用基因编辑技术构建大动物模型 以大动物猪为例,进行详细介绍基因编辑技术在大动物模型中的应用
利用CRISPR/Cas9构建基因修饰大型动物(猪)流程
基因修饰大型动物优势
利用CRISPR/Cas9构建基因修饰大动物(猪)模型介绍
11:15-12:00 利用基因编辑技术构建动物模型的详细案例介绍 利用CRISPR/Cas9构建基因修饰小鼠方法与相关基因修饰小鼠模型
利用CRISPR/Cas9构建基因修饰大动物(猪、猴)方法与相关基因修饰大动物模型
拓展基因编辑技术在其它物种中的应用 拓展基因编辑技术在其它物种中的应用
12:00-13:30 午饭及午休
第二天下午 13:30-15:00 实验结果的点评与讨论 CRISPR/Cas9载体构建讨论
目的靶基因的基因组DNA片段的PCR扩增,电泳检测PCR产物结果讨论
PCR产物T7E1酶切,电泳鉴定基因修饰情况结果讨论
Sanger测序鉴定基因编辑结果:CRISPR/Cas9质粒阳性转化子测序结果确认;Sanger测序阅读基因编辑情况;如何从测序色谱图中阅读靶向突变等位基因型
15:00-15:30 CRISPR/Cas9脱靶问题分析 脱靶产生的原因
脱靶检测方法
降低脱靶问题的方法
15:30-15:45
15:45-16:30 基因编辑领域进展大梳理与全面拓展 基因编辑技术的应用拓展介绍:SHERLOCK-V1、SHERLOCK-V2等应用于检测方面的拓展,Base editing
结合当下新型冠状病毒热点,基因编辑工具用于检测新型冠状病毒、基因编辑工具有可能应用于新冠治疗等应用的介绍与拓展
Cas系列突变体的介绍与应用
基因编辑的拓展应用(如应用于杜氏营养肌不良综合征、白内障、消灭蚊子、植物中的应用、细菌中的应用等)
基因编辑工具的伦理问题于讨论

【讲师背景】
李博士,副研究员。2014年博士毕业于德国慕尼黑工业大学大型动物生物技术研究所, 获极优等荣誉学位(MAGNA CUM LAUDE)。主要研究领域为基因编辑动物模型构建与应用研究,成功构建过ROSA26基因定点敲入大动物模型、Kras基因点突变大动物模型、小鼠基因编辑肝癌模型等,在基因编辑研究领域积累了较好的研究知识背景,擅长对该领域知识讲解和传授,讲解深入浅出、逻辑性强,并可针对性对基因编辑实际操作问题进行解答与启发,以期更好地让基因编辑工具应用于您的工作和学习研究中。目前已发表论文22篇,其中第一作者/并列通讯作者SCI论文12篇,以第一发明人申请国家发明专利2项。主持完成国家自然科学基金等项目6项,获得上海市实验动物学会2020年度学会工作先进个人、2019年 “ICLAS-CALAS国际青年奖”、2018年第三十届上海市优秀发明选拔赛银奖、2017年上海市人才发展资金等。
【收费标准】
会务费用:线上:2800元/人​​​​​​​
会议时间:2022年4月9-10日
会议地点:线上:腾讯会议网络会议室
主办方:上海循掘生物科技中心

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